為什麼不在PCR中使用解旋酶

不使用解旋酶，因為它難以控制。

解旋酶通常只能開啟DNA雙螺旋的很短部分，並且在特定的PCR操作中無法控制何時開啟該DNA片段，更不用說它可以起作用多長時間了。 具體來說，沒有辦法知道DNA解旋酶是開啟了模板DNA中與引物結合的部分，還是不結合的部分，或者它是否只是分離了與模板結合的引物; 也不能保證解旋酶需要足夠長的時間才能解開 DNA 以使引物與模板結合，並且解旋酶能夠在引物與模板結合後立即移開，以免阻礙 DNA 合成酶的進展; 我們甚至不能讓DNA在這個過程中複製，DNA解旋酶一直在複製叉的前面，幫助DNA複製等等。 有很多不可控的因素使得DNA解旋酶在這個階段不可能按照我們希望它在體外的方式工作。

在細胞內，解旋酶需要DNA複製複合物（下圖）的幫助來精確調控DNA複製，而在體外實驗中，每增加乙個蛋白質的引入，就會使實驗系統更複雜、更難控制、更昂貴，因此DNA變性的工作留給了高溫。

PCR機實際上是乙個先進的“電爐”，可以瞬間公升高或降低溫度，每秒約6攝氏度。

第 1 步：在高溫下解旋，約 90 攝氏度（大約），DNA 雙鏈氫鍵將立即解旋。

第二步：退火，你應該聽說過，PCR儀器的溫度在十秒左右下降到60度以上，“引物”會在雙鏈形成氫鍵之前結合。

第 3 步：DNMP 開始合併，合成開始，兩者都是 5'端麵 3'結束繼續，不會有 Gunch 片段，因為 DNA 已經解開了，哈哈。

DNA一般以雙鏈形式存在，雙鏈比單鏈更穩定。

DNA複製需要雙鏈開放，同樣，PCR擴增也需要單鏈模板，所以就有了PCR引物這樣的東西，引物就像是導聯，告訴聚合酶“Na，從這裡開始”。PCR的基本過程包括變性、退火和伸長。 DNA的雙鏈主要通過氫鍵連線在一起，在高溫下，氫鍵容易斷裂，雙鏈變成單鏈，為PCR提供了模板。

當然，解旋酶也可以破壞氫鍵，我只需要考慮 1酶活性高，酶活性有限，如果酶量不足，是否會影響最終收率，酶不便宜。 引物是必需的，如果使用解旋酶，引物會從模板上裂解嗎？

熱變性DNA一般可以在緩慢冷卻後重新摺疊，簡而言之，復性不是將兩條互補的單鏈變成雙鏈，因此根據這一特性，在DNA聚合酶的作用下，可以複製已經與引物結合的模板鏈。 因此，PCR必須對鄭橡樹宴會進行溫度變化。 一般來說，DNA在高溫下容易變性，這決定了所使用的聚合酶必須耐高溫。

你好！ 隨後，PCR技術在生物學研究和臨床應用中得到廣泛應用，成為分子生物學研究中PCR反應最重要的耐高溫Taq

DNA聚合酶，一次加入反應溶液後，加入到DNA擴增溶液中。

僅代表個人意見，不喜歡就不要噴，謝謝。

我以前做過PCR-RFLP，說實話，它不是一種穩定有效的鑑定方法，當時我和你有同樣的問題。

其中一種情況是你選擇了錯誤的酶，而酶位點在你的基因上不存在。

二是你已經根據別人公布的序列確定了酶切割位點的存在，但是由於基因突變等情況，你案例中的酶切割位點發生了變化。

第三，即使你的情況中有酶消化位點，酶消化也會因為酶消化系統不合適而失敗，例如底物濃度高和酶失活。