如果在細胞培養箱中意外開啟細胞蓋會不會被汙染

以下是防止細胞培養物汙染的方法：

1.從培養箱中取出細胞之前，請用酒精清潔雙手（或手套），以縮短開門的時間和次數。 在將燒瓶放入培養箱之前，請用酒精對表面進行消毒，待酒精蒸發後再放入，以免在培養箱中保留過多的乙醇蒸氣。

2、操作過程中必不可少的防護服、口罩、手套。 操作前，準備好實驗所需的所有物品，以減少行走，並將物品有序放置在潔淨臺可及的地方，同時留出足夠的操作空間。

3.操作時，應盡量不要及時蓋住試劑，移至操作區域外圍，盡量不要越過開啟的容器。

4.使用移液槍時，應傾斜容器以方便移液，不要接觸瓶筒和內壁。 一旦發生吸力，應及時用酒精棉球擦拭，避免液體殘留引起的細菌滋生。

5.冷凍儲存細胞時，需要擰緊冷凍儲存管的蓋子。 要解凍細胞，請從液氮罐中取出小瓶並輕輕轉動蓋子以確認蓋子已擰緊。

這應該是可能的，因為室溫對大腸桿菌來說是可以接受的。

我想這很好，你不是說你把質粒扔進熱水裡，但應該沒問題;

你還想說你在溫水中加了氨嗎？

但似乎沒問題

種菌不難，但長出來的時候不敢採摘，久了搖沒有質粒怎麼辦，還是老老實實的再翻一次。

二氧化碳不僅是細胞生長的基本成分，而且還與維持培養基的pH值有關。

細胞的內外培養需要精心構思的氣體環境，氧氣和二氧化碳是細胞存活的必要條件。 氧氣參與細胞的三羧酸迴圈，為細胞的存活、代謝和合成提供能量; 二氧化碳既是細胞的代謝產物，也是細胞生長的重要成分，也與維持培養基的pH值有關。 大多數細胞的適當pH值範圍往往是。

在開放培養中，5% 的二氧化碳氣體比例是合適的。

CO2不僅是細胞代謝的產物，也是細胞所需的成分，主要與培養基pH值的維持直接相關。 大多數動物細胞需要乙個pH值約為該值的微鹼性環境。 在細胞培養過程中，隨著CO2釋放量的增加，培養基會變成酸性，因此常新增NaHCO3來調節CO2的釋放趨勢，CO2的加入可以抑制該反應的進展。

培養箱內CO2濃度應與培養基中NAHC3濃度平衡，CO2培養箱的氣體環境一般為95%空氣和5%CO2。

其實沒有必要把它放在CO2培養箱裡，主要是因為省了很多麻煩。 當沒有二氧化碳培養箱時，不是還有人在做細胞培養嗎？ 當時是普通的恆溫培養箱和生化培養箱。

但是，需要時刻監測溶液中的pH值和濕度，工作量增加很多，失敗的概率也增加了很多。

我家裡只有幾百片的恆溫培養箱，使用含有HEPES的培養基，pH值可以控制，但時間不宜太長，一般是幾天。 雖然現在的大學和科研院所都有二氧化碳培養箱，但並不是每個人都使用它們，而且很多時候他們使用生化培養箱，我認為沒有太大區別。

細胞BAI培養是合適的。

培養基的pH值一般為Na2HCO3 將根據培養物新增到 DAO 中

箱內CO2濃度不同，以達到合適的pH值。 如果只是培養纖維等更容易培養的細胞，只培養2或3天觀察生長情況，不做後續實驗，就可以在普通培養箱中湊合著用。 但是，如果長時間培養，細胞狀態會逐漸惡化，如果是比較嬌嫩的細胞，可能根本無法培養。

培養前對培養基進行高壓滅菌，用於接種細胞的工具通過燒灼滅菌，在乾淨的工作台上接種，最後在培養箱中孵育。

“有很多小東西在細胞間隙中移動”，可能是血清中的黑膠蠕蟲。 血清可在培養箱中孵育兩天，400次看是否有移動的黑黑色（但不是很棒狀），如果有黑色橡膠蠕蟲。 如果出現這種情況，就要換血清了，據說最好的是北美的血清，但是價格比較貴，澳洲的血清也不錯，但是我們實驗室也用的是澳洲血清，出現了少量的黑色橡膠蟲，沒辦法。

培養基應該不容易出現問題，雙特異性抗體一般都是由綠鏈組成的，當然也有可能你的細胞本來就被汙染了。 支原體汙染不能用顯微鏡看到。

支原體 立克次體汙染 它們屬於專性細胞內寄生微生物 動物細胞培養最怕這一點 汙染的原因與血清細胞的運作有關 您接觸的細胞可能會讓它們寄生 嘗試改變細胞。

一種可能是介質儲存不好，不要在室溫下放置太久，用完後再放回4度。

二是操作過程中要小心，移液管、瓶口、培養皿不能相互接觸。

三者的培養基是用雙特異性抗體新增的，只使用非常特殊的抗體。

只要溫度不是很高，對凍存溶液的成分沒有破壞性影響，也就是說，凍存溶液的理化性質不改變，那麼它就完全可以使用了。

細胞冷凍儲存是細胞儲存的主要方法之一。 在-196液氮中冷凍儲存細胞可以暫時將細胞從生長狀態中移除，並且可以保留其細胞特性，以便在需要時可以對細胞進行復甦以進行實驗。 此外，可以適量儲存一定量的細胞，可以防止細胞因培養下的細胞受到汙染或其他意外事件而丟失，對細胞種子儲存起到重要作用。

此外，細胞凍存可用於購買、傳送、交換和運輸某些細胞。

細胞冷凍儲存和解凍的基本原理是慢速冷凍和快速解凍，這已被證明可以最大限度地提高細胞活力。 目前，甘油或二甲基亞碸多用作細胞冷凍儲存中的保護劑，可以提高細胞膜對水的滲透性，緩慢冷凍可使細胞內的水滲出細胞，減少細胞內冰晶的形成，從而減少冰晶形成造成的細胞損傷。 應採用快速解凍使細胞復甦，這樣可以保證細胞外晶體在很短的時間內融化，避免因緩慢解凍滲入細胞形成細胞內再結晶而對細胞造成損害。

對於細胞恢復，我們可以推薦 BioLife 的 Thawstar 系列細胞程式復甦裝置。

BioLife BioLite Thawstar 細胞程式復甦儀。

細胞的儲存和運輸應在冷凍儲存條件下實現，細胞的提取和應用通常採用水浴的解凍和復甦方法，而傳統的水浴解凍和復甦則面臨無法控制和管理的問題，人的主觀誤判和水浴的汙染帶來了一定的風險。

2019年4月，Biolife Solutions全資收購Astero及其細胞程式復甦公司的智財權，並資助了THAWSTAR細胞程式復甦技術高階模型的開發，其中CFT系列模型已應用於全球生物製藥公司、研發公司、大學研究單位，甚至醫院實驗室， 回收效果得到業界認可。作為Astero中國的合作夥伴，上海拉西工業科技有限公司在中國大陸、香港和台灣銷售全系列的Astero產品。

Thawstar細胞程式復甦裝置。

它是一種用於程式化細胞回收的儀器。 與傳統的水浴操作相比，該儀器操作簡單，重複性好，可有效避免操作過程中的汙染風險。 由於該儀器可自動執行一系列程式化復甦操作，因此消除了基於操作人員主觀猜測的錯誤操作和汙染的風險，並且重現性很高！

THAWSTAR系統適用於儲存在乾冰、-80冰箱、液氮等上的冷凍細胞。 操作很簡單，例如，ThAWSTAR CFT2只需插入小瓶中並等待其完成，當處理完成後，小瓶將自動彈出。

THAWSTAR CFT細胞程式復甦裝置可以直接在生物安全櫃的BSC中進行！

1.恢復。

1.從液氮中取出小瓶，立即將其放入37水浴中，輕輕搖晃。 液體融化後（大約幾分鐘），將其取出並噴灑一些酒精，然後將其放入乾淨的工作台中。

2.將上述細胞懸液吸入含有10ml培養基的15ml離心管中（用培養基洗滌冷凍管以洗掉粘附在壁上的所有細胞），並以1000rpm離心5分鐘。

3.倒掉上清液，加入1ml培養基以懸浮細胞。 吸入裝有10ml培養基的10cm培養皿中，輕輕來回左右搖晃，使培養皿中的細胞均勻分布。

4.標記細胞型別和日期、培養者名稱等，放入CO2培養箱培養，細胞貼壁後更換培養基。

5.每 3 天更換一次培養基。

2.生成。

1.當培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時傳代。

2.吸出原始介質。

3.加入適宜的胰蛋白酶（只要能覆蓋細胞即可）消化1-2分鐘。

4.細胞變圓後，加入等體積的含血清培養基以終止消化。

5.用移液器將細胞懸浮。

6.將細胞吸入15ml離心管中，並以1,000rpm離心5分鐘。

7.倒掉上清液，加入1-2ml培養基，然後將細胞全部吹勻。

8.根據細胞型別，將細胞轉移到多個培養皿中。 一般來說，有 5 個癌細胞和 3 個正常細胞。 繼續耕耘。

3.冷凍儲存。

消化細胞並離心（同上）。 用製備的冷凍儲存溶液懸浮細胞，將它們分裝到滅菌的冷凍儲存管中，靜置幾分鐘，並註明細胞型別和冷凍儲存日期。 4 30min、-20 30min、-80 過夜，然後放入液氮灌溉儲存。

凍存溶液製備：70%完全培養基+20%FBS+10%DMSODMSO應緩慢新增，並隨時搖晃。

注意無菌操作！