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將PCR產物進行凝膠電泳,切割長度相近的DNA條帶(凝膠**),將純化的DNA轉殖到質粒載體中(先酶消化再連線),將載體轉化為細菌擴增,提取質粒,以質粒上的已知序列作為對目標DNA進行測序的原因, 通過BLAST比較比較測序產物與小鼠基因的相似性。這是基因工程的一般步驟。
你問上面的問題,你可能沒有真正接觸過分子方向的實驗,你說的螢光標記在理論上是可行的,但是成本太高,而且探針只能測量部分序列,無法比較整個DNA序列,綜合成本和效率,測序是最省力的。 當然,也可以用酶消化做乙個基本的判斷,如果基因同源性高,可以不用測序。
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。。。那是很多。
一樓說的重組根本不需要,你只需要知道這個序列是不是靶序列,所以你可以直接把PCR產物送到測序公司進行測序,花25塊錢,等兩三天就能得到結果。 酶消化和螢光還做什麼,是不是太累了?
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將PCR產物復溶到T載體上,然後轉化為細菌。 重新排序。 然後比較網際網絡上老鼠的基因。
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一般通過測序,這是目前比較可靠的做法,將擴增的片段**連線到購買的T載體上,進行轉化實驗,並將最終的細菌溶液傳送給測序公司,然後將結果與您之前擁有的小鼠的基因序列進行比較,就可以使用DNAMAN了。
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通常對同源轉殖進行測序,然後將序列與GeneBank下面的序列對齊。 如果同源性大於 70%,它應該是您想要的基因。
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最快的方法是將兩者的基因交叉,否則你必須對它們進行測序。
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基因轉殖和PCR很重要:轉殖的目的是增加DNA的數量,保證成功率。
分子轉殖和傳統轉殖根本不是一回事。 PCR主要是擴增目標DNA,然後將其轉化為轉殖載體(可以理解為某種工程微生物),相當於複製許多拷貝,每個儲存的拷貝稱為轉殖。
一般而言。 基因轉殖技術涉及將不同生物體的基因與具有自主複製能力的載體DNA在體外人工連線,構建新的重組DNA,然後送入受體生物體進行表達,從而產生遺傳物質和狀態的轉移和重組。 因此,基因轉殖技術又稱分子轉殖、基因無性繁殖、基因操作、重組DNA技術和基因工程。
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如果你想要這個寶物,你可以問醫生醫生的意見是什麼,如果你不想要,你也可以問醫生,看看醫生的意見是什麼,如果沒有,你也可以問醫生,看看醫生的意見是什麼,你也可以考慮一下,你要考慮一下, 你也可以問問醫生,看看醫生的意見是什麼,你也可以再想一想,不要太著急,如果你太著急了,對自己不好,你說什麼,你說是,你自己想想,我說的是真的,不要騙你,如果你不相信我, 你可以問醫生。
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PCR的產物必須是DNA。
通俗地說,這些產物都是雙鏈DNA,從上游引物開始,到下游引物結束。 但如果你非常嚴格,只有不到 1% 的產品是 3'單鏈尾雙鏈DNA和一些沒有時間恢復的單鏈DNA,但我們通常在實驗中忽略這些。 您可以仔細考慮PCR的原理,尤其是前3個週期。
產物不會是RNA,首先,我們在PCR中使用的Taq酶是DNA聚合酶; 其次,PCR是一種體外DNA擴增方法,這意味著它是人工操縱的,我們只在實驗中加入脫氧核醣核苷酸(DNTP),所以產物只會是DNA。
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TA的轉殖效率比較高,如果靶基因的序列未知,那麼核酸內切酶就不能正確選擇,所以TA一般是轉殖測序,然後用酶消化。
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1.單酶消化。
一般來說,這種情況會根據實際大小來判斷,對於質粒,有三種情況,線性質粒、超螺旋質粒和開環結構,它們在瓊脂糖凝膠中的重量不一樣,按大小順序,從上到下:
開環、線性、超級線圈。
一般來說,單次消化後,此時的情況與開環結構相似,顯示整個質粒的全長,與製造商進行比較就足夠了。
2.雙酶切割位點。
在這種情況下,產物中分布著兩個空源片段,乙個大片段和乙個小片段,從瓊脂糖凝膠電泳來看,前面是小片段,後者是大片段。
然後,我們可以將靶片段和質粒的實際長度與切割後的長度進行比較,以獲得靶片段的分布位置。
右邊的兩個是質粒對照。
1.注意調整切割時間,盡量完全切割。
2.在電泳過程中設定對照實驗。
3.注意區分單酶消化位點和雙酶消化位點。
是黃色感嘆號,是網線問題,是你沒有連線網路,你重新登入輸了再試。或者看看你在網上回答的時候提示了什麼程式碼,然後看看原因是什麼。。。
在這種情況下,您可以在關機後從電腦顯示器上取下VGA插頭,用細砂紙打磨每個接線柱,然後清理掉細砂屑,然後將其插入插座並重試。 >>>More