如何確定平板上的單個菌落是否為純培養物

在離心管中用 1 ml 無菌水熔化樣品，充分混合，移液管放入另乙個裝有無菌水的離心管中，充分混合; 移液到另乙個裝滿無菌水的離心管中後，充分混合。 重複上述步驟數次，例如10次（取決於您擁有的樣品數量）。 將一系列梯度細菌溶液均勻地塗佈在平板上，並在適當的溫度下孵育足夠的時間才能看到。

平板越低，細菌越少，最終可以分離出單個菌落。 它從細菌發展而來，即分離成細菌。 上述操作需要無菌操作，所有器皿必須消毒。

菌落由單個細菌細胞或同一物種的一堆細胞組成，在表面或合適的固體培養基內生長和繁殖到一定程度，形成可見的子細胞群落。

正常情況下，單個菌落是純菌落，如果不確定是否是純菌落，可以繼續對菌落進行傳代培養，看看下一代是否是相同的菌落形態，下一代是否具有相同的菌落形態，這意味著該菌落是純培養物。

觀察菌落形態，平板上單個菌落形態一致，問題不大;

選擇一些你覺得不一樣的做革蘭氏染色，並在顯微鏡下觀察它們應該能夠確定它們是否是純細菌;

如果還有疑問，請提及不同單菌落的基因組並進行菌株鑑定，這一次您可以得出結論。

可以用肉眼觀察，不同的菌落會表現不同，或者可以稀釋並再次培養。

單個菌落被重新劃線或稀釋，如果形成單個菌落，則為純菌落。

我通常使用劃線方法，這種方法比較簡單。

培養基。 製備過程中菌種汙染，在中海培養基上產生多種菌落，接種過程中發生無菌操作。

如果不符合要求，會導致培養基上出現多種菌落，而大腸桿菌是細菌的一種，因此不會在培養基上產生多種菌落。

無菌技術的主要內容。

對實驗操作的空間、操作人員的衣物和手部進行清潔消毒;

對用於微生物培養的器具、接種器具和培養基等器具進行消毒。

為避免周圍環境中的微生物汙染，實驗操作應使用酒精燈進行。

在火焰附近進行;

在實驗操作過程中，應避免滅菌材料和器皿與周圍物品接觸

這是因為當線被標記時，接種杯被燃燒以殺死接種環上剩餘的細菌溶液。

板條帶分離法是通過在板介質表面進行分割槽和條帶來分離微生物的方法。 其原理是通過在固體介質表面“從點到線”多次稀釋微生物樣品來分離微生物樣品。

在無菌操作中，通過接種環取少量待分離物料，在無菌板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞的數量會隨著劃線次數的增加而減少並逐漸分散。 如果條紋合適，可以將微生物逐個分散，培養後，可以在平板表面獲得單個菌落。

操作方法： 1.倒入盤子，將牛肉醬蛋白腖瓊脂培養基溶解並倒入盤子，使其水平靜置等待凝固。

2.將接種環在酒精點燃火焰上，等待冷卻，在接種環中取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的混合菌液。

3.左手握住瓊脂板，輕輕掀開蓋子，同時靠近火焰，右手握住接種環並將其伸入培養皿中，在板上的某個區域做成形狀並備註線條，劃線時以30-40°的角度輕輕接觸接種環與板表面， 並用手腕用力在表面上輕快滑動，以免破壞板的表面或將其嵌入底座中。

4.將接種杯燒滅接種環上殘留的菌液，等待冷卻，然後將接種環伸入培養皿中，與第一區畫線的地方稍作接觸後，轉90°，繼續在第二區畫線。

5.划船完成後，燒掉接種杯，冷卻後用同樣的方法在其他區域標記線條。

6.標記完所有線條後，用專用蠟筆在盤子底部標明菌株、日期、組和名稱。 將整個培養皿倒置放入培養箱中。

孵育24-48小時後，取出觀察。 注意菌落的閉合、大小、顏色、邊緣、表面結構、透明度等特徵。

劃線培養板和培養溶液可以通過以下方式短時間儲存：

1.需要4臺冰箱存放在搜查局。

1.液體石蠟保鮮方法。

先將液體石蠟滅菌，然後放入37培養箱的手中，蒸發水蒸氣以備後用。 然後將需要儲存的菌株放置在最大斜率合適的介質中。

在培養基培養中，用無菌移液管吸出滅菌後的液體石蠟，注射到生長的傾斜培養基中，劑量比傾斜平面頂部高1cm。 試管需要直立，在4或室溫下儲存，一般儲存1年左右，無孢子洩漏滯留細菌。

2.高水平半固體瓊脂石蠟儲存方法。

待儲存菌株通過平板標記分離後，反覆刺穿單個菌落，用接種針接種到高濃度半固體瓊脂培養基中，孵育37 12小時後取出，無菌操作。

將滅菌後的液體石蠟滴加到半固體瓊脂培養管表面約高度，在冰箱中儲存4年，每年轉移一次。

3.蒸餾水保鮮法。

取滅菌蒸餾水6-7ml，加入試管斜面，用吸管研磨，洗去菌根並充分混合，將菌液分裝成滅菌螺旋瓶中，或用橡膠塞封住，儲存4年，可存活數年。

1）通過觀察菌落的特徵;

2）再次劃定單個菌落。

除了觀察菌落的特徵外，純培養物的確定只能結合顯微鏡檢測個體的形態特徵後才能確定，而某些微生物的純培養物只能通過一系列的分離純化過程和各種冰雹早期徵兆的鑑定才能獲得。

1）通過觀察菌落的特徵;

2）再次劃定單個菌落。

除了觀察菌落的特徵外，純培養物的確定只能結合顯微鏡檢測個體的形態特徵後才能確定，而某些微生物的純培養物只能通過一系列的分離純化過程和多種特徵鑑定才能獲得。