蛋白質印跡的步驟

通過單向電泳分離蛋白質並轉移到硝酸纖維素膜上，在那裡用放射性或酶標記的特異性抗體檢測相應抗原的存在。

Western blotting 是 1975 年 Southern blotting 成立後用於印跡蛋白質的類似方法，稱為 Western blotting。

Western blotting是通過SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳分離不同分子量的蛋白質，然後通過轉移電泳將凝膠上分離的蛋白質轉移到固體載體上。 固相載體包括NC（硝酸纖維素）膜、尼龍膜和PVDF（聚偏二氟乙烯）膜。 通常使用的PVDF膜尺寸為M，如果目標蛋白的分子量小於10kD，則選擇PVDF膜。

有濕式和半乾式轉移。 針對靶蛋白的非標記抗體（一抗）與膜雜交，使抗體與靶蛋白特異性結合，然後與過氧化辣根標記的二抗結合，最後與ECL試劑反應，通過X射線膠片**和顯影等一系列反應，達到檢測靶蛋白的目的。

與Southern或Northern雜交方法類似，Westernblot使用聚丙烯醯胺凝膠電泳，分析物為蛋白質，“探針”為抗體，“顯色”為二抗標記。 通過PAGE分離的蛋白質樣品被轉移到固體載體（例如，硝酸纖維素膜）中，該載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，並可以保持通過電泳分離的肽的型別及其生物活性。 以固相載體上的蛋白質或肽為抗原，對應抗體進行免疫反應，再與酶或同位素標記的二抗反應，通過底物顯色或放射自顯影法檢測經電泳分離的特異性靶基因所表達的蛋白質成分。

該技術還廣泛用於檢測蛋白質水平的表達。

西方色彩發展主要有幾種方法：

i.放射自顯影。

ii.底物化學發光ECL

iii.底物螢光ECF

iv.基板 DAB 是彩色的。

目前，常用的底物化學發光ECL和底物DAB著色，第一種方法是在相同的水平和實驗條件下使用，而底物化學發光ECL通常用於發表的文章。 只要買現成的試劑盒，操作就比較簡單，原理如下（二抗用HRP標記）：反應底物為過氧化物+魯公尺諾，如果遇到HRP，會發光，可以製成薄膜**，條帶可以被洗掉。

Western blotting是指通過聚丙烯醯胺凝膠電泳分離蛋白質樣品，然後轉移到固體載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，然後利用抗體通過免疫學和通褲反應檢測目標蛋白，分析基因旋轉的表達程度。

在Western blotting方法中，將得到的蛋白質樣品在SDS-聚丙烯醯胺凝膠上進行電談，以分離不同分子量的Picca蛋白質，然後通過轉移電泳將凝膠中分離出的含嫉妒蛋白轉移到固相載體中。

蛋白質印跡是將蛋白質轉移到膜上，然後使用抗體進行檢測。 對於已知表達的蛋白，可採用相應的抗體作為檢測的一抗，新基因的表達產物可通過融合部分的抗體進行檢測。