過氧化氫酶活性的測定，過氧化氫酶活性的測定

過氧化氫酶活性的測定 – 紫外線吸收。

原理]H2O2在240nm波長處有很強的吸收性，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應液（A240）的吸光度隨反應時間的延長而降低。過氧化氫酶的活性可以根據測得的吸光度的變化率來測量。

儀器和器具]。

紫外分光光度計; 離心機; 臼; 1 250ml容量瓶; 刻度吸管2根，刻度吸管1根2ml; 3支10ml試管; 恆溫水浴;

試劑】磷酸鹽緩衝液（含1%聚乙烯吡咯烷酮）;

H 2 O 2 （用高錳酸鉀校準）。

方法] 1酶溶液提取：稱取新鮮小麥葉或其他植物組織，放入研缽中，加入2 3ml預冷磷酸鹽緩衝液和少量石英砂研磨成勻漿，轉移至25ml容量瓶中，用緩衝液將研缽沖洗數次，合併沖洗液，定體積至刻度。

混合均勻，取量瓶置5冰箱靜置10min，取上澄清液，以4000rpm離心15min，上清液為過氧化氫酶粗提物。 5 儲存以備後用。

2.測定：取試管3個10ml，其中樣品測定管2個，空管1個，按表40-2的順序加試劑。

表40-2 紫外吸收法測定H2O2的樣品溶液配置表。

管道編號。 s1s2s3

粗酶溶液（ml）。

磷酸（ml）。

蒸餾水（毫公升）。

25 預熱後，向每管中加入H2O2，記錄每管加入後立即的時間，迅速倒入石英比色皿中，在240nm處測定吸光度，每1min讀數1次，共測4min，測定全部3管後，按下式計算酶活性。

3.結果計算：

在1分鐘內由A240還原的酶的量為1酶活性單位（U）。

過氧化氫酶活性 （U gfw min） =

其中 a240 = as0

AS0—對照管與煮沸的死酶溶液的吸光度值;

As1， As2—樣品管吸光度值;

vt—粗酶提取物總體積（ml）;

v1—測定用粗酶體積（ml）;

FW—試樣鮮重（g）;

每滴是 1 個酶活性單位 （U）;

t—將過氧化氫新增到最後讀數時間（分鐘）中。

所謂觸覺酶試驗，就是將3%的H202滴在乾淨的載玻片上，然後取出細菌放入H202中，觀察是否有小氣泡。 過氧化氫酶可以將 H202 轉化為 H20+O2，氧氣是液體中的氣泡。

這必須使用H2O2過氧化氫，這應該在生活中找到。 豬肝中含有過氧化氫酶，研磨粉碎，過濾取上清液，加入過氧化氫（取等量兩份，分開，一組作為對照），觀察產氧速度（可觀察氣泡）。 我不知道這是不是你想知道的？

希望對您有所幫助！

AS1 和 AS2 是吸光度，如圖所示。 吸光度由機器直接測量。

讓我告訴你如何測量酶活性：

你不是有7個點嗎，在坐標紙上畫出這7個點對應的吸光度值，時間是橫軸，吸光度值是縱軸，那麼這7點就可以形成一條近似的直線，那麼，這條線的斜率就是單位時間吸光度的遞減值， 並按公式可計為酶活性。

1. 目的。

過氧化氫酶常見於植物組織中，其活性與植物的代謝強度、抗寒性和抗病性有關，因此經常被測定。 通過實驗，可以了解過氧化氫酶的作用，掌握測定過氧化氫酶活性的原理和方法。

二是原理。 過氧化氫酶將過氧化氫分解成水和氧氣，其活性表示為一定時間內分解的過氧化氫量，當酶與底物（H2O2）反應完成時，通過碘圓法測定未分解的H2O2的量。 以鉬酸銨為催化劑，使H2O2與Ki反應放出游離碘，再用硫代硫酸鈉滴定碘，反應式為：

h2o2 + 2ki + h2so4 —→i2 + k2so4 + 2h2o

i2 + 2na2s2o3 —→2nai + na2s4o6

根據空白與硫代硫酸鈉滴定劑量的測定之差，可得到過氧化氫酶分解的H2O2量。

第四，實驗程式。

1.過氧化氫酶的提取。

選取甘蔗功能葉，擦去主脈切成小塊，攪拌均勻，快速稱取1g放入冷凍研缽中，加入少量CaCO3粉和石英砂，加入蒸餾水3 4ml，在冰浴上研磨至均質化，將勻漿洗滌至100ml容量瓶中，經漏斗用蒸餾水洗滌成100ml容量瓶， 在秤中加入蒸餾水，搖勻並過濾。然後取濾液10ml〜100ml置容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻使酶稀釋。

2.酶活性測定。

取容量瓶4個100ml，數，精密加稀釋的酶溶液10ml於每瓶中，立即加5ml至數瓶中停止酶活性，作空白測定。

將每瓶置於20水浴中5 10min（如室溫超過20，以室溫為準）。 保溫後，每瓶正好加入5ml，搖勻，記錄酶促反應開始時間。

將每個瓶子放入20水浴中，讓酶與底物（H 2 O 2 O 2）相互作用5分鐘。 時間到了，迅速取出，立即向瓶中加入5ml，停止酶活性。

向 4 瓶中的每乙個加入 20 ki 1 ml 和 3 滴 10 （NH4.）6mo7O4，搖勻，用mol·l 1 Na2S2O3

滴定至淡黃色後，加入1個澱粉溶液5滴作為指示劑，然後mol·L 1 滴定Na2S2O3至滴定終點為藍色消失，並記錄Na2S2O3的量。

過氧化物酶是植物中一種重要的呼吸酶，其活性與酚類代謝和植物抗性密切相關。

在環境生物學方面，測量過氧化物酶活性有助於了解植物的進化階段以及進化趨勢。 更重要的是物件適應給定環境的能力。

正如我剛才所說，過氧化物酶與植物抗性密切相關，活性越高，當然抗逆能力越強，低，即耐逆能力越弱。

這是我檢查的資訊，以幫助你總結！

過氧化物酶可以將過氧化氫分解成氧氣和水。

這是通過定時和量化過氧化氫的量以及在定量酶的催化下產生的氧氣量來完成的。