革蘭氏染色時，如何保證染色過程正確 可靠的結果 5

在同一張載玻片的兩端，對已知的革蘭氏陽性細菌金黃色葡萄球菌和未知桿菌進行革蘭氏染色; 同樣，在另一張載玻片上，對已知的革蘭氏陰性細菌大腸桿菌和要鑑定的未知桿菌進行革蘭氏染色。 通過將待鑑定的桿菌的革蘭氏染色結果與同一組實驗中引入的已知對照細菌進行比較，可以確定待鑑定細菌的革蘭氏染色結果。 因此，可以排除染色中可能出現的假陽性和假陰性。

關鍵在於染料溶液，尤其是結晶紫的濃度和脫色時間，如果控制不好，最常見的情況是導致陽性菌變成陰性結果，陰性菌變成陽性結果。 另外，沖洗時要小心，否則一些不太好的固定樣品會脫落，影響效果。

一般用結晶紫染一分鐘，再用碘溶液染一分鐘，用酒精脫色的時間在書上大多說一分鐘，但要求是要等到顏色不脫落，才能重新染一分鐘。

這些時間取決於您正在製作的染料的濃度、房間內的溫度和標本的厚度。 而其他因素則掌握在自己手中，不必遵循一定的標準。

影響革蘭氏染色結果正確性的關鍵環節是脫色劑乙醇的處理為了保證革蘭氏染色結果的正確性，需要控制乙醇脫色時間，盡量使用標準染色方法。

實驗中經常出現假陽性和假陰性，假陽性主要是由於脫色不完全，這可能是由於塗片太厚或結晶紫染色過多，導致脫色不完全。

革蘭氏染色的原理：

結晶紫和碘液體媒染劑經過初步染色後，形成不溶於細胞壁的結晶紫和碘絡合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁厚、肽聚醣網層和緻密交聯，因此當它們用乙醇或丙酮脫色時，由於失水而減少網孔， 而且不含脂質，所以在乙醇處理上不會有縫隙，所以結晶紫和碘絡合物可以牢牢地留在壁上，讓它仍然是紫色的。

但由於其細胞壁薄，外膜層脂質含量高，肽聚醣層薄，交聯不良，以脂質為主的外膜在遇到脫色劑後迅速溶解，薄而鬆散的肽聚醣網路不能阻止結晶紫和碘絡合物的溶解，因此經乙醇脫色後仍為無色， 然後用沙黃等紅色染料復染，使革蘭氏陰性菌變紅。

以上內容參考：

革蘭氏染色。

一般包括初級染色、媒染染色、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法有：

1）塗片固定。

2）草酸銨。

將結晶紫染色 1 分鐘。

3）用蒸餾水沖洗。

4） 蓋上碘溶液約1分鐘。

5）用清水清洗，用吸水紙吸水。

6）加入幾滴95%酒精，輕輕搖晃脫色，20秒後用清水洗滌吸水。

7）染色1分鐘後，用蒸餾水沖洗。乾燥，顯微鏡檢查。

影響革蘭氏染色結果正確性的環節主要是手繪、加熱固定、脫色等過程。 最關鍵的環節之一是脫色過程。

常用的革蘭氏染色劑由哈克冰雹肢修飾。

操作步驟為：生產。

初染、媒染、脫色、復染、乾燥、觀察。 影響革蘭氏染色結果正確性的關鍵環節是脫色劑乙醇的使用。

為了保證革蘭氏染色結果的正確性，必須控制乙醇脫色時間，並盡可能採用標準化的染色方法。

革蘭氏染色法一般包括四個步驟：初染、媒染染、脫色和復染。 結果：革蘭氏陽性菌為藍紫色，革蘭氏陰性菌為紅色。

革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學成分和生理性質上存在許多差異，染色反應也不同。 現在人們普遍認為，革蘭氏陽性菌含有核蛋白、鎂鹽和多醣的特殊複合物。

它與碘和結晶紫的絡合物結合非常牢固，不易脫色，陰性菌絡合物結合度低，吸附染料差，容易脫色，是染色反應的主要依據。

由於老化，脫色是革蘭氏染色中最關鍵的乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關鍵環節：脫色不足，陰性菌誤感染成陽性菌; 過度脫色，陽性菌被陰性菌誤染。 因此，脫色時間一般控制在20-30s。

革蘭氏染色。

它是細菌學中廣泛應用的重要鑑別染色方法，屬於復染法。 這種染色方法是丹麥製造的。

1884年由醫生Gram發明的香華最初用於識別肺炎球菌。

肺炎克雷伯菌。 革蘭氏染色法一般包括初級染色、媒染染色、脫色和復染四個步驟。

染色原理：

經過一次染色和媒染染後，細胞內形成不溶於水的結晶紫。

單碘大分子複合物。 由於革蘭氏陽性菌的細胞壁較厚，肽聚醣含量較高，分子交聯較緊密，肽聚醣網在用乙醇洗脫時會因脫水而明顯收縮，且基本不含脂質，因此乙醇處理無法溶解壁上的縫隙。

結果，結晶紫和碘絡合物仍然牢牢地困在細胞壁中，使其呈紫色。 革蘭氏陰性菌由於其壁薄，肽聚醣含量低，交聯鬆散，所以經過乙醇處理後，肽聚醣網不易收縮，並且具有較高的脂質含量，因此當乙醇溶解脂質時，細胞壁上會有較大的間隙，複合物很容易溶解出細胞壁， 因此，在用乙醇脫色後，細胞變得無色。

此時，紅色染料被復染，革蘭氏陰性菌將獲得一層新的顏色——紅色和革蘭氏陽性菌。

還是紫色的。

革蘭染色這個操作的關鍵是嚴格控制酒精脫色的程度。 因為如果脫色過度，陽性菌就會被誤染成陰性菌; 如果脫色不夠，陰性細菌可能會被誤染成陽性細菌。

革蘭氏染色是細菌鑑定最常用的染色方法之一。 未染色的細菌在顯微鏡下極難觀察，因為它們與周圍環境之間的折射率差異非常小。 染色後，細菌與環境形成鮮明的對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列和一些結構特徵，可用於分類鑑定。

革蘭氏染色是一種復染方法，即標本固定後，不使用四肢，先使用龍膽紫。

染色，媒染劑用碘溶液，然後用酒精脫色，再用稀釋和發紅復染。 除了染色後可以看到的細菌形態外，細菌還可以分為兩類，即那些沒有被酒精脫色並保留紫色的細菌是革蘭氏陽性菌。

g)。那些被酒精脫色和復染成紅色的人是革蘭氏陰性菌。

g-)。革蘭氏染色的原理尚不確定，可能與細菌攜帶的核糖核酸有關。

細菌壁結構的滲透性，等電點。

和其他因素。 金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌和炭疽芽孢桿菌等致病菌是革蘭氏染色陽性菌。

百日咳桿菌，大腸桿菌，傷寒桿菌，痢疾桿菌，霍亂弧菌，流行性腦膜炎。

梁球菌和淋病均為革蘭氏陰性菌。 因此，根據細菌的革蘭氏染色特性，可以縮小鑑定範圍，有利於進一步分離鑑定，做出疾病的診斷。 由於各種抗石硝酸菌的抗菌譜不同，革蘭氏染色仍可作為抗生素選擇的參考。