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鹽析法沉澱蛋白質的原理是:由於在蛋白質溶液中加入大量的鹽,如硫酸銨、氯化鈉等,使蛋白質表面的電荷被中和,破壞蛋白質表面的水合膜,從而達到蛋白質沉澱的效果。
蛋白質的基本單位是氨基酸,經脫水和縮合形成肽鏈,蛋白質是由一條或多條多肽鏈組成的生物大分子。 其分子表面多為親水基團,能吸引水分子在其表面形成水合膜,抑制顆粒的相互聚集,其表面也具有電荷,使顆粒不易排斥成團,防止蛋白質沉澱。
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鹽析是指在蛋白質的水溶液中加入中性鹽,隨著鹽濃度的增加而使蛋白質沉澱的現象。 中性鹽是一種強電解質,溶解度大,在蛋白質溶液中,一方面與蛋白質爭奪水分子,破壞蛋白質膠體顆粒表面的水膜; 另一方面,大量的中和電荷對蛋白質顆粒,使蛋白質顆粒在水中積聚沉澱,如下所示:
1.水化層的破壞。
在高濃度的中性鹽溶液中,由於鹽離子比蛋白質更親水,它們與蛋白質膠體競爭與水結合,破壞蛋白質的水合層。 在高濃度的中性鹽溶液中,由於蛋白質和鹽離子對溶液中的水分子具有吸引力,因此產生了水合現象,但是它們之間存在競爭,當加入大量中性鹽時,鹽解離產生的離子爭奪溶液中大部分游離水, 從而破壞蛋白質的水合,導致蛋白質的溶解度降低,因此從溶液中沉澱出來。
2.銷毀了電荷。
由於鹽是一種強電解質,解離作用強,鹽的解離可以抑制蛋白質弱電解質的解離,從而降低蛋白質的電荷,更容易聚集和沉澱。
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原理:鹽析出蛋白質沉澱的原理是降低蛋白質的溶解度,使蛋白質從溶液中縮合沉澱出來。
蛋白質分子從溶液中結塊沉澱的現象稱為蛋白質沉澱。 由於存在水合層和電雙層,蛋白質溶液是穩定的膠體溶液。 如果在蛋白質溶液中加入某種電解鉀,破壞顆粒表面的雙電層或調節溶液的pH值以達到等電點,蛋白質顆粒會因電荷損失而變得不穩定並沉澱出來。
蛋白質沉澱是毒理學分析過程中對生物樣品進行預處理的常用方法。 對於富含蛋白質的脫硫樣品,在分離和提取過程中應去除大量干擾測定的蛋白質沉澱物,使待測毒素仍在溶液中。
一般情況下,先將樣品組織研磨,然後加入蛋白質沉澱劑進行蛋白質沉澱,組織中的蛋白質與沉澱劑形成疏鬆的絮狀沉澱物,而毒物則留在溶液中。
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鹽析出沉澱蛋白的原理如下:
鹽析是蛋白質分離和富集的常用方法。 在這種方法中,通過新增足夠量的鹽來沉澱蛋白質,使蛋白質失去其溶解度。 該原理基於蛋白質的溶解度與環境離子濃度之間的關係。
在蛋白質溶液中,一方面與蛋白質爭奪水分子,破壞蛋白質膠體顆粒表面的水膜; 另一方面,蛋白質顆粒上的大量電荷被中和,使水中的蛋白質顆粒積聚並沉澱。
常用的中性鹽有氯化鈉、硫酸鈉等,但硫酸銨最多。 得到的蛋白質一般不會失活,在一定條件下可以重新溶解,因此這種沉澱蛋白質的方法廣泛應用於蛋白質的分離、濃縮、儲存和純化工作。
蛋白質分子由具有不同極性、電荷等特性的氨基酸組成,具有複雜多樣的結構和性質。 在水中,它們被極化的分子相互作用並表現出一定的溶解度和穩定性。 當外部新增電解質(例如鹽)時,水中的離子濃度增加,這會影響蛋白質的溶解度。
具體來說,當鹽的濃度上公升到一定水平時,鹽中的陰離子和陽離子會與蛋白質分子中的本徵離子(如羧基、氨基)競爭鍵合,從而引起蛋白質分子溶劑化層的變化。
隨著鹽濃度的不斷增加,蛋白質分子的溶解度逐漸降低,蛋白質分子形成微小顆粒並沉澱。 這種造粒現象通常發生在離子強度及以上。
鹽析沉澱可用於分離和富集蛋白質。 首先將要分離的混合物加入到高濃度的鹽溶液中,然後緩慢攪拌或搖晃,以確保樣品充分混合。 接下來,用離心機離心沉澱,使其沉澱在離心管的底部。
最後,除去上清液作為除去的重複步驟。
鹽析沉澱具有簡單、方便、快速等優點,無需複雜的裝置和操作即可在短時間內分離目標蛋白。
但是,它僅適用於蛋白質穩定、pH 值在中性範圍內、表面無明顯帶電且對離子強度敏感的蛋白質分子,應注意監測鹽的含量,以防止過高的鹽濃度損壞樣品。
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蛋白質簡介蛋白質是生命的物質基礎,是有機大分子,是構成細胞的基本有機物,是生命活動的主要載體。 沒有蛋白質就沒有生命。 氨基酸是蛋白質的基本組成部分。
蛋白質鹽析的原理由於蛋白質是親水性大分子,因此在水溶性絡合物溶液中存在電雙層結構,以保證分子的溶解度平衡穩定。 當加入鹽時,鹽會電離成離子態,離子的電學性質破壞了蛋白質的電雙層結構,使其沉澱和沉澱。 不可能新增濃酸和濃鹼,腐蝕性環境會使蛋白質變性。
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答]:蛋白質在水溶液中的溶解度取決於蛋白質周圍的親水基團與水形成水合膜的程度,以及蛋白質分子帶電荷的事實。當蛋白質溶液中加入中性鹽時,中鹽對水分子的親和力大於飢餓蛋白質的親和力,因此蛋白質分子周圍的水合膜減弱甚至消失。
同時,在蛋白質溶液中加入中性鹽後,由於離子強度的變化,大量的蛋白質表面電荷被中和,導致蛋白質溶解度降低,蛋白質分子之間聚集沉澱。