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聚合酶鏈式反應(PCR)的基本原理是酶合成反應。 也就是說,在模板DNA、引物和脫氧核醣核苷酸存在下,DNA鏈在DNA聚合酶的作用下被擴增和延伸。
在實驗中,DNA雙螺旋的氫鏈被破壞,通過加熱解離成單鏈DNA,並變性。 然後,通過退火,突然冷卻使引物與其互補模板區域性形成雜交鏈; 然後,在DNA聚合酶、脫氧核醣核苷三磷酸底物和鎂離子存在下,在聚合酶的催化下,以引物為起點延伸DNA鏈。
延伸資料:PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外95°C的高溫下變性會變成單鏈,低溫(通常在60°C左右)引物和單鏈根據鹼基互補配對的原理,然後調節溫度到DNA聚合酶的最佳反應溫度(約72°C), DNA沿磷酸聚合成五碳糖(5'-3')在互補鏈的合成方向上。基於聚合酶的PCR儀實際上是一種溫控裝置,可以在變性溫度、復性溫度和延伸溫度之間很好地控制。
反應特徵:伴有嗜睡。
特異性強; 高靈敏度;
簡單快捷;
純度要求低。
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答:色素酶鏈沉默反應 (PCR) 系統的基本成分包括模板 DNA、超發光氧化物引物、熱穩定 DNA 聚合酶、DTP 和含有 Mg2+ 的緩衝液。
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這個話題很亂,我會告訴你,PCR是用來在體外複製DNA的5個拷貝,1->2->4->8->16->3232 DNA,每個DNA有乙個或兩個DNA。
單鏈來自初始樣本(與體內複製完全相同的解決方案),即需要 31 個 DNA 的 T。
眾所周知,它有乙個單鏈鹼基a:g:t:c=1:2:3:4。
DNA分子是雙鏈的。
所以互補鏈 t:c:a:g=1:2:3:4 雙工 t 佔 (3+1) 20=
所以在樣本中,t 有乙個。
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DNA一般以雙鏈形式存在,雙鏈比單鏈更穩定。
DNA複製需要雙鏈開放,同樣,PCR擴增也需要單鏈模板,所以有PCR引物這樣的東西,它只是乙個引物,告訴聚合酶“現在,從這裡開始”。 PCR的基本過程包括變性、退火和伸長。 DNA的雙鏈主要通過氫鍵連線在一起,在高溫下,氫鍵容易斷裂,雙鏈變成單鏈,為PCR提供了模板。
當然,解旋酶也可以破壞氫鍵,我只需要考慮 1酶活性高,酶活性有限,如果酶量不足,是否會影響最終收率,酶不便宜。 引物是必需的,如果使用解旋酶,引物會從模板上裂解嗎?
熱變性DNA一般可以在緩慢冷卻後重新摺疊,簡而言之,復性不是將兩條互補的單鏈變成雙鏈,因此根據這一特性,在DNA聚合酶的作用下,可以複製已經與引物結合的模板鏈。 因此,PCR必須有乙個溫度變化的過程。 一般來說,DNA在高溫下容易變性,這決定了所使用的聚合酶必須耐高溫。
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無法控制複製的程序。 也就是說,如果使用解旋酶,它將不斷“展開複製”。 而你最終得到的只是一根線,所以它必須是高溫的(我認為這更正確)。
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解旋酶在高溫下變性,而PCR在高溫下進行。
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隨後,PCR技術在生物學研究和臨床應用中得到了廣泛的應用,成為分子生物學研究中最重要的PCR反應。
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PCR中的DNA
變性是在高溫步驟中進行的,因此請使用耐高溫的。
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LZ很周到,你問的問題是新開發的PCR技術,解旋酶依賴性擴增(HDA)有相關的介紹。