為什麼通過電泳LAMP反應擴增的產物是梯形帶？

DOI：可以參考本文中的燈管原理圖，燈反應的產物很多，有線狀、啞鈴形、花椰菜狀，含有目標片段的拷貝越多，產物越長，產物非常複雜，每個產物對應乙個電泳帶，所以燈管產品電泳帶呈梯形。

PCR電泳帶主要是瓊脂糖凝膠電泳。 PCR方法具有靈敏度高、速度快等優點，但檢測成本高，儀器昂貴，不適合基層單位應用。

環介導的等溫擴增（LAMP）是Notomi等人於2024年開發的一種新的核酸擴增方法。 LAMP法針對靶基因的6個區域設計了6個特異性引物，採用鏈置換DNA聚合酶在恆溫條件下完成高效的核酸擴增反應，具有特異性高、等溫擴增的特點。

本研究針對侵襲質粒抗原H基因設計了志賀氏痢疾LAMP引物，對痢疾志賀氏菌進行檢測，優化反應條件，測定檢測的特異性和靈敏度，建立志賀氏痢疾檢測方法，並與傳統PCR方法進行比較。

你可以把燈產品想象成乙個放大靶標的多聚體，有很多單元聚集在一起，所以有梯度帶，有時點阱之間有梯度帶和糊狀帶。

我覺得這兩種方法的原理是完全不同的，燈，環介導的等溫擴增法，英文名稱是loop-mediatedisothermal

擴增是一種新型的核酸擴增方法，其特點是針對靶基因的6個區域設計4個特異性引物，以及DNA聚合酶（BST）的鏈置換。

DNAPOLYMERASE）、60--65恆溫擴增，10、9、10、10倍的核酸擴增約15-60分鐘即可實現。

PCR技術的基本原理類似於DNA的自然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 PCR包括三個基本反應步驟： 變性-退火-延伸： 模板DNA變性：

模板DNA加熱至93左右一段時間後，將PCR擴增形成的模板DNA雙鏈或雙鏈DNA解離，使其成為單鏈，使其與引物結合，為下一輪反應做準備; 模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA加熱變性成單鏈後，溫度降至55左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合; 引物延伸：DNA模板-引物偶聯物在TaqDNA聚合酶的作用下，以DNTP為反應原料，靶序列為模板，根據鹼基互補配對和半保留複製的原理，合成與模板DNA鏈互補的新型半保留複製鏈，重複迴圈變性-退火-延伸三個過程可獲得更多的“半保留複製鏈”， 而這條新鏈可以成為下乙個週期的模板。

每個週期需要 2 到 4 分鐘才能完成，2 到 3 小時才能將基因擴增數百萬倍。

酶、引物設計、擴增過程和產品測試都不同，所以應該沒有太大關係。 雖然燈相對簡單，但兩者都有利有弊。

通常，PCR只有乙個靶帶。

但是燈會有很多放大帶。

電泳的主要目的是看擴增的產物片段長度是否與目標產物一致，後期也可通過切割凝膠**來收集產物。 當然，產品的純度和完整性也可以通過其亮度和寬度來判斷。 非特定產品可以通過雜項帶來判斷。

並非每次PCR後都能完美執行目標片段，需要通過電泳提供客觀依據。

你的意思是你的空白控制項沒有模板嗎？ 引物可能形成二聚體、條帶和片段較小。

如果底部條帶為 100 bp，則您的亮條帶是引物二聚體，即您沒有擴增產物。

如果需要設計定量PCR引物，可以直接在“引物庫”中搜尋，而不是搜尋序列、設計引物、選擇引數、確定引物等，輸入基因名稱，直接提供引物序列，進行非特異性檢測。

Web 鏈結。

PCR非特異性擴增是指PCR裂紋模具擴增的條帶不是你想羨慕的引物。

在非目標頻段與模板不匹配，導致擴充套件產品不是目標頻段。 瓊脂糖電泳中的非特異性擴增。

，您可以看到其他波段出現在目標波段之外。 非特異性擴增的原因有很多，如Mg2+濃度高、退火溫度低、引物特異性差等。

房東，這個問題解決了嗎？ 我也有這個問題。